水稻氮高效基因ORF6B T-DNA 插入突变体的鉴定及定量分析开题报告
1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.本课题的意义
水稻(oryza sativa l.)是我国第一大粮食作物,全国近2/3人口以稻米为主食。育种家一直致力于培育高产优质水稻,水稻的高产离不开营养元素的使用,而氮素则为其中相当重要的营养元素,如何让水稻高效的利用氮素则显得尤为重用。海藻糖不仅可以提供物种生长发育所需的能量,还可使物种对外界恶劣环境表现出非凡抗逆耐受力,但高等植物中几乎检测不到它的存在,然而tpp基因广泛存在于高等植物的基因组中,海藻糖-6-磷酸磷酸酶(tpp)为海藻糖合成途径中的重要酶基因。研究tpp基因在高等植物中的进展、功能以及与蛋白激酶snrk1的代谢调控关系,为今后研究、利用tpp基因创造水稻氮高效的新种质提供了一种新的研究方向。
2.国内外研究概况
2. 研究的基本内容和问题
1.研究的目标
从水稻中克隆ostpp6b基因,探索这种基因的表达与氮素同化、吸收的哪条途径相关,是否通过snrk1蛋白激酶的表达或活性对该途径产生影响。
2.研究的内容
3. 研究的方法与方案
1.研究方法与技术路线
ostpp6bt-dna插入突变体材料与野生型农艺性状的观察与比较→设计三个引物lp、rp和bp(lp和rp是t-dna插入位点两侧的引物,bp是t-dna区段上的引物),经过pcr,在野生型植株,lp和rp扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带);在杂合突变体,lp和rp扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带),bp和rp扩增出分子量较小的产物(小带);在纯和突变体,bp和rp扩增出分子量较小的产物(小带),根据扩增产物鉴定ostpp6bt-dna插入突变体材料→氮素相关基因含量测定与比较→snrk1蛋白激酶活性的测定。
2.实验方案
4. 研究创新点
前人对该基因与氮素相关的研究少之又少,以何种途径影响氮素的吸收、利用的研究更是几乎没有,并且通过图位克隆的方法对该基因进行定位。
5. 研究计划与进展
2018.8.1-8.15查阅资料,确定实验方案,准备相关原料、设备等
8.16-9.15 ostpp6b基因克隆和序列分析
9.16-10.31 氮素相关基因定量检测
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